Hai! Sebagai pemasok kit amplifikasi isotermal RNA, saya sering ditanya pertanyaan ini: "Dapatkah kit amplifikasi isotermal RNA digunakan untuk analisis kuantitatif RNA?" Baiklah, mari selami langsung ke dalamnya dan hancurkan.
Pertama, apa amplifikasi isotermal RNA? Berbeda dengan reaksi rantai polimerase yang lebih baik (PCR) yang membutuhkan siklus suhu berganda, amplifikasi isotermal RNA terjadi pada suhu konstan. Ini adalah teknologi yang cukup bagus yang telah mendapatkan popularitas dalam beberapa tahun terakhir.
Salah satu keuntungan utama menggunakan kit amplifikasi isotermal RNA adalah kesederhanaannya. Anda tidak memerlukan termosikler mewah dengan semua suhu - mengubah pengaturan. Ini membuatnya lebih mudah diakses, terutama untuk pengujian point - of - perawatan atau di sumber daya - pengaturan terbatas. Tetapi pertanyaan besar tetap: dapatkah itu digunakan untuk analisis kuantitatif?
Mari kita mulai dengan melihat prinsip -prinsip dasar analisis kuantitatif RNA. Singkatnya, kami ingin tahu persis berapa banyak molekul RNA spesifik yang ada dalam sampel. Ini sangat penting di banyak bidang, seperti virologi untuk mengukur viral load, atau dalam studi ekspresi gen untuk memahami bagaimana gen diatur.
Metode tradisional untuk analisis RNA kuantitatif, seperti PCR real -time (qPCR), telah menjadi standar emas. QPCR menggunakan pewarna atau probe fluoresen untuk mendeteksi jumlah DNA yang diamplifikasi (yang terbalik - ditranskripsi dari RNA) secara nyata. Siklus di mana fluoresensi melintasi ambang batas tertentu (nilai CT) kemudian digunakan untuk menghitung jumlah awal RNA dalam sampel.
Sekarang, untuk kit amplifikasi isotermal RNA. Kit ini biasanya berfungsi dengan menggunakan enzim yang dapat memperkuat RNA pada suhu konstan. Misalnya,Kit amplifikasi cepat isotermal mira dasar - iiadalah salah satu produk kami yang memanfaatkan teknologi ini. Ini dapat dengan cepat memperkuat target RNA, tetapi dapatkah kita menggunakannya untuk mengukurnya?
Jawabannya sedikit lebih rumit daripada ya atau tidak sederhana. Di satu sisi, ada beberapa tantangan. Tidak seperti QPCR, yang memiliki metode yang ditetapkan dengan baik untuk kuantisasi berdasarkan nilai CT, amplifikasi isotermal RNA tidak memiliki kesetaraan langsung. Kinetika amplifikasi dalam sistem isotermal dapat lebih kompleks, dan faktor -faktor seperti kondisi reaksi awal, aktivitas enzim, dan ketersediaan substrat dapat memiliki dampak yang lebih besar pada laju amplifikasi.
Namun, itu tidak berarti itu tidak mungkin. Beberapa peneliti telah menghasilkan cara -cara kreatif untuk membuat amplifikasi isotermal RNA yang cocok untuk analisis kuantitatif. Salah satu pendekatan adalah menggunakan standar internal. Sama seperti di qPCR, Anda dapat menambahkan jumlah molekul RNA kontrol yang diketahui ke sampel Anda. Dengan membandingkan amplifikasi RNA target dengan RNA kontrol, Anda bisa mendapatkan perkiraan kuantitas RNA target.
Cara lain adalah dengan menggunakan metode deteksi berbasis fluoresensi dalam kombinasi dengan amplifikasi isotermal RNA. Misalnya, beberapa kit kami, sepertiStrip uji asam amplifikasi cepat isotermal kit uji asam nukleat, dapat dimodifikasi untuk menggabungkan probe fluorescent. Dengan mengukur intensitas fluoresensi dari waktu ke waktu, Anda dapat memantau proses amplifikasi dan berpotensi menggunakannya untuk kuantisasi.
Mari kita juga berbicara tentang keunggulan menggunakan kit amplifikasi isotermal RNA kami untuk analisis kuantitatif bila dibandingkan dengan metode tradisional. Seperti yang saya sebutkan sebelumnya, kesederhanaan dan kecepatannya merupakan nilai tambah yang besar. Dengan kit kami, Anda bisa mendapatkan hasil dalam waktu yang jauh lebih singkat dibandingkan dengan qPCR, yang biasanya memakan waktu satu jam atau lebih. Ini sangat penting dalam situasi di mana diagnosis cepat sangat penting, seperti selama wabah penyakit menular.
Selain itu, kit kami sangat spesifik. Mereka dirancang untuk menargetkan hanya urutan RNA yang menarik, mengurangi kemungkinan hasil palsu - positif. Spesifisitas ini sangat penting untuk analisis kuantitatif yang akurat, karena Anda ingin memastikan Anda hanya mengukur RNA yang Anda minati.
Sekarang, mari kita sentuh pada beberapa aspek praktis. Jika Anda mempertimbangkan untuk menggunakan kit amplifikasi isotermal RNA kami untuk analisis kuantitatif, ada beberapa hal yang perlu diingat. Pertama, Anda perlu mengoptimalkan kondisi reaksi. Ini termasuk hal -hal seperti konsentrasi enzim, primer, dan reagen lainnya. Reaksi yang dioptimalkan dengan sumur akan memberi Anda hasil yang lebih dapat direproduksi, yang merupakan kunci untuk kuantisasi yang akurat.
Kedua, Anda perlu memvalidasi metode kuantitatif Anda. Ini berarti menjalankan beberapa ulangan sampel yang diketahui dan membandingkan hasil dengan metode referensi, seperti qPCR. Dengan melakukan ini, Anda dapat menetapkan keakuratan dan ketepatan analisis kuantitatif Anda menggunakan kit amplifikasi isotermal RNA kami.
Kami juga memiliki produk hebat lainnya,Kit amplifikasi cepat isotermal mira dasar. Meskipun untuk amplifikasi DNA, prinsip -prinsip analisis kuantitatif dapat serupa dalam beberapa hal. Ini dapat digunakan dalam kombinasi dengan analisis RNA dalam beberapa kasus, misalnya, ketika Anda ingin mempelajari hubungan antara tingkat DNA dan RNA dalam sel.
Sebagai kesimpulan, sementara kit amplifikasi isotermal RNA menghadapi beberapa tantangan ketika datang ke analisis kuantitatif RNA, dimungkinkan dengan pendekatan yang tepat. Perusahaan kami berkomitmen untuk menyediakan kit berkualitas tinggi dan mendukung pelanggan kami dalam mengeksplorasi potensi teknologi ini untuk aplikasi kuantitatif.
Jika Anda tertarik untuk mempelajari lebih lanjut tentang kit amplifikasi isotermal RNA kami atau ingin membahas bagaimana mereka dapat digunakan untuk kebutuhan analisis kuantitatif spesifik Anda, kami ingin mendengar dari Anda. Cukup hubungi kami untuk memulai percakapan tentang pengadaan dan bagaimana kami dapat bekerja sama untuk memenuhi tujuan penelitian Anda.
Referensi
- Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., & Hase, T. (2000). Loop - Penguat isotermal yang dimediasi dari DNA. Penelitian Asam Nukleat, 28 (12), E63 - E63.
- Gootenberg, JS, Abudayyeh, Oo, Lee, JW, Essletzbichler, P., Dy, A., Joung, J., ... & Zhang, F. (2018). Deteksi asam nukleat dengan CRISPR - CAS13A/C2C2. Sains, 360 (6387), 439 - 444.