Di sini, kami membuat sCRAM (motif berdekatan protospacer suboptimal (PAM)-yang dimediasi CRISPR RNA dan Cas12a nuclease dikombinasikan dengan amplifikasi cepat isotermal multienzim), sebuah platform diagnostik cepat dan bebas ekstraksi-yang mendeteksi ASFV dalam waktu 20 menit. sCRAM mengintegrasikan langkah pelepasan asam nukleat yang cepat (40 derajat, 5 menit) dengan reaksi satu-tabung yang menggabungkan amplifikasi isotermal multienzim (MIRA) dan CRISPR/ yang dimediasi PAM suboptimal
Sistem Cas12a (37 derajat, 15 menit), memungkinkan pembacaan visual gratis instrumen melalui sinar UV atau strip aliran lateral (LFS).sCRAM menunjukkan sensitivitas deteksi salinan tunggal dan tidak menunjukkan reaktivitas silang dengan lima patogen babi yang umum (PRRSV, PPV, JEV, PCV, dan PRV). Evaluasi terhadap 111 sampel simulasi dan klinis (termasuk darah, plasma, dan usap) menunjukkan kesesuaian 100 % dengan qPCR untuk pembacaan UV dan 98,20 % untuk LFS
pembacaan, dengan kedua metode menunjukkan spesifisitas 100%. Kesederhanaan, kecepatan, dan kemampuan beradaptasi di lapangan dari sCRAM menggarisbawahi potensinya untuk pengawasan ASFV yang terdesentralisasi dalam keadaan-terbatas sumber daya, menawarkan alat yang ampuh untuk pengendalian wabah.
Dalam studi ini, kami mengembangkan sCRAM, platform deteksi ASFV yang cepat dan dapat diterapkan di lapangan yang mengintegrasikan CRISPR/Cas12a yang dimediasi PAM suboptimal dengan amplifikasi isotermal multienzim. Pengujian ini mencapai sensitivitas-salinan 1 salinan/uL dalam waktu 20 menit dan tidak menunjukkan reaktivitas-silang dengan patogen babi utama. Validasi klinis pada sampel darah, plasma, dan usap menunjukkan kesesuaian penuh dengan qPCR menggunakan pembacaan sinar UV dan akurasi 98,20 % melalui strip aliran lateral. Dengan pengoperasian yang disederhanakan, sensitivitas dan spesifisitas tinggi, serta interpretasi hasil visual, sCRAM menawarkan potensi besar untuk pengawasan ASFV di lokasi dan aplikasi diagnostik titik perawatan yang lebih luas.
