Di bidang diagnostik molekuler, reaksi berantai polimerase (PCR) telah lama dianggap sebagai standar emas untuk deteksi asam nukleat. Dalam beberapa tahun terakhir, teknologi amplifikasi isotermal, yang diwakili oleh amplifikasi polimerase rekombinase (RPA), semakin mendapat perhatian karena kecepatan, kesederhanaan, dan kesesuaiannya untuk-pengujian di lokasi.
Meskipun PCR dan RPA merupakan metode amplifikasi asam nukleat, keduanya berbeda secara signifikan dalam prinsip kerja, persyaratan peralatan, dan skenario aplikasi, sehingga setiap teknologi cocok untuk kebutuhan diagnostik yang berbeda.
1. Prinsip Inti: Siklus Termal vs. Amplifikasi Suhu-Konstan
PCR adalah proses biokimia yang mampu mengamplifikasi satu molekul DNA menjadi jutaan salinan dalam waktu singkat. Reaksinya bergantung pada siklus termal berulang dan terdiri dari tiga langkah utama:
1.Denaturasi (90–95 derajat ) – DNA untai ganda-dipisahkan menjadi untai tunggal.
2.Annealing (55–65 derajat ) – Primer mengikat urutan target.
3.Ekstensi (72 derajat ) – DNA polimerase mensintesis untaian DNA baru.
Melalui siklus-yang dikontrol suhu ini, DNA target diamplifikasi secara eksponensial dengan presisi tinggi. Namun, PCR memerlukan instrumen siklus termal yang rumit dan biasanya memerlukan waktu 1–2 jam untuk menyelesaikannya.
Sebaliknya, RPA beroperasi pada suhu konstan 37–42 derajat, memungkinkan amplifikasi asam nukleat secara cepat tanpa siklus termal. Teknologi ini mengandalkan tindakan terkoordinasi dari protein rekombinase, protein pengikat DNA-untai tunggal, dan untai-pengganti DNA polimerase untuk mencapai amplifikasi target yang sangat spesifik dalam kondisi isotermal.
DNA polimerase yang digunakan dalam RPA memiliki aktivitas perpindahan untai tetapi tidak memiliki aktivitas eksonuklease 5'→3'. Selama amplifikasi, primer luar memanjang sepanjang untai cetakan. Ketika mereka menemukan daerah beruntai ganda yang disintesis dari primer dalam, polimerase tidak dapat mendegradasi untai hilir dan justru menggantikannya, sehingga menghasilkan produk amplifikasi baru.
Keseluruhan reaksi diselesaikan pada suhu konstan, sehingga menghilangkan kebutuhan akan instrumentasi yang rumit dan memungkinkan pengujian-titik-perawatan dan-yang sebenarnya di lapangan. Dengan menggabungkan transkriptase balik, RPA juga dapat diterapkan pada deteksi target RNA.
Hasil amplifikasi dapat dianalisis menggunakan berbagai format pembacaan, termasuk deteksi titik akhir,-pemantauan fluoresensi real-time, pengujian aliran lateral, dan dapat diintegrasikan lebih lanjut dengan sistem CRISPR-Cas, mikrofluida, atau-pengurutan generasi berikutnya (NGS) untuk pengembangan pengujian tingkat lanjut.
Skenario Aplikasi: Presisi Laboratorium vs. Pengujian Cepat di-Lokasi
PCR telah menjadi salah satu teknologi diagnostik molekuler yang paling berharga dan tetap menjadi standar emas untuk pengujian asam nukleat.
Berkat akurasi,{0}}efektivitas biaya, dan skalabilitasnya yang tinggi, PCR banyak digunakan dalam diagnostik klinis, laboratorium terpusat, lembaga penelitian, dan program pemeriksaan-skala besar, yang infrastruktur dan personel terlatihnya tersedia.
Sebaliknya, RPA menawarkan keuntungan nyata dalam diagnostik{0}di lokasi yang cepat. Dengan amplifikasi yang diselesaikan hanya dalam waktu 20 menit, persyaratan peralatan minimal, dan pengoperasian sederhana, RPA cocok untuk digunakan.
- Layanan kesehatan primer dan pengaturan darurat
- Inspeksi bea cukai dan perbatasan
- Skrining lapangan terhadap penyakit hewan dan tumbuhan
- Pengujian keamanan lingkungan dan pangan
Ketika dikombinasikan dengan perangkat portabel dan strip aliran lateral, RPA memungkinkan pengujian molekuler yang cepat dan andal di luar laboratorium tradisional.
MIRA (Amplifikasi Cepat Isotermal Multienzim)adalah teknologi amplifikasi isotermal milik Amp Future. Ia termasuk dalam keluarga teknis yang sama dengan RPA dan terinspirasi oleh mekanisme rekombinasi dan perbaikan DNA alami, memanfaatkan berbagai enzim fungsional untuk mencapai amplifikasi asam nukleat yang cepat pada suhu konstan.
MIRA menggunakan sistem terkoordinasi yang terdiri dari lima enzim utama, termasuk helicase, recombinase, protein pengikat-DNA-untai tunggal, dan DNA polimerase, untuk memungkinkan:
- Kisaran suhu pengoperasian yang luas: 25 derajat –45 derajat
- Amplifikasi cepat: hasil dalam 20 menit
- Sensitivitas dan spesifisitas tinggi
- Peningkatan keamanan dan pengurangan risiko kontaminasi
MIRA adalah teknologi amplifikasi asam nukleat yang dirancang khusus untuk pengujian-di lokasi dan-tempat-perawatan.
Berdasarkan platform MIRA, Amp Future telah mengembangkan portofolio produk komprehensif untuk POCT molekuler cepat, termasuk:
Agen Pelepas Asam Nukleat Cepat:
Asam nukleat yang dapat diamplifikasi diperoleh dalam waktu 5 menit pada suhu kamar; penghambatan rendah, memungkinkan pemuatan sampel penuh hingga 50 μL; transportasi dan penyimpanan suhu kamar, tidak diperlukan perlindungan cahaya.
Reagen Amplifikasi Asam Nukleat Isotermal:
Amplifikasi selesai dalam 5-20 menit, cepat dan efisien; berbagai bentuk reagen (bubuk terliofilisasi, mikrosfer terliofilisasi, dll.); berbagai metode penyajian hasil (elektroforesis, fluoresensi, strip uji).
Perangkat Portabel Miniatur:
Detektor isotermal digital,-alat pengujian berukuran saku, mudah dipegang dengan satu tangan, dilengkapi dengan bank daya, membebaskan Anda dari kendala laboratorium dan menghadirkan pengujian asam nukleat yang akurat ke lapangan.
Strip Tes Tunggal/Beberapa:
Dioptimalkan berdasarkan metodologi MIRA untuk kompatibilitas yang lebih baik; dikombinasikan dengan teknologi MIRA, menonjolkan kenyamanan.
Penganalisis Amplifikasi Asam Nukleat Sepenuhnya Otomatis:
Hanya memerlukan satu operasi pemuatan sampel untuk deteksi otomatis sepenuhnya; batas deteksi hingga satu salinan; amplifikasi isotermal dan pembatasan otomatis mengurangi risiko kontaminasi.
Paket-Pengujian Cepat di Lokasi:
Pengujian-di-tempat, kapan saja, di mana saja, semuanya dalam satu paket; menyelesaikan pengujian dalam 30 menit, akurat dan sensitif.
Untuk informasi produk atau solusi lebih lanjut, jangan ragu untuk menghubungi kami.